內(nèi)參是由管家基因編碼表達(dá)的蛋白，它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)恒定。主要用來校正蛋白質(zhì)定量、上樣過程中存在的誤差，從而保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。也可以作為空白對(duì)照，檢測(cè)蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完全、整個(gè)蛋白免疫印跡顯色發(fā)光體系是否正常。內(nèi)參抗體種類很多，常見的內(nèi)參抗體包括β-actin、β-tubulin、GAPDH等，那么我們?cè)撊绾芜x擇合適的內(nèi)參抗體呢？

樣本種屬來源：

?      哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、HistoneH3等

?      植物樣本則可以選擇actin、Rubisco等

?      研究者也需要參照文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參

目的蛋白表達(dá)部位：

?      全細(xì)胞蛋白檢測(cè)一般用GAPDH、β-actin、β-tubulin等抗體作為內(nèi)參。而針對(duì)于核蛋白的定量，特別是樣本蛋白就是核蛋白時(shí)，選擇恰當(dāng)?shù)暮说鞍變?nèi)參則更能體現(xiàn)內(nèi)部參照的價(jià)值。常用的核內(nèi)參抗體有Lamin A、Lamin B、Histone H3；除此之外，其它常見的核蛋白內(nèi)參還有PCNA、K70、K80等；在一些文獻(xiàn)報(bào)道中，ERK2、TATA binding protein (TBP) 以及c-Jun、c-Fos等都有使用。而對(duì)于膜蛋白檢測(cè)，常用的內(nèi)參抗體為Na+ /K+-ATPase。

?      對(duì)于一些植物的樣本，則需要特別的植物Actin蛋白作為內(nèi)參。當(dāng)實(shí)驗(yàn)樣品中只是核蛋白，而不是細(xì)胞總蛋白提取液時(shí)，可以用組蛋白H（Histone H），或者增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）等作為核內(nèi)參抗體。對(duì)于線粒體蛋白的檢測(cè)，常用COX IV或VDAC1作為內(nèi)參抗體，這里面COX IV又是被引用最多的線粒體內(nèi)參。對(duì)于葉綠體蛋白的檢測(cè)，常用Rubisco作為內(nèi)參。

目的蛋白大?。?/span>

選擇內(nèi)參抗體時(shí)應(yīng)考慮目的蛋白分子量大小，通常保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5kDA以上

蛋白表達(dá)要恒穩(wěn)：

挑選的內(nèi)參是否會(huì)受實(shí)驗(yàn)變化影響。例如，GAPDH是常用的內(nèi)參，但在缺氧和糖尿病等疾病存在下，會(huì)增加GAPDH在特定細(xì)胞和組織中的表達(dá)，在代謝糖酵解的研究中就不適合作為內(nèi)參。


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AS132640（Actin）AS03037（Rubisco）

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